养殖场非洲猪瘟病毒变异株防控技术指南
 
中国动物疫病预防控制中心
国家非洲猪瘟区域实验室(广州)
 
 
 
为指导养殖场及时发现非洲猪瘟病毒变异株,提升非洲猪瘟 防控能力,制定本技术指南.
一、病毒特点
非洲猪瘟病毒变异株包括基因缺失株、自然变异株、自然弱毒 株等.与2018 年传入的非洲猪瘟病毒毒株相比,变异株基因组序 列发生不同程度的改变,包括核苷酸突变、缺失、插入或短片段替 换等,部分变异株失去红细胞吸附活性.
从生物学特性看,部分病毒单基因缺失株的致病力与感染剂 量呈相关性,病毒双基因缺失株感染猪可间歇性排毒,病毒可以水 平传播.部分失去红细胞吸附活性的变异株具有水平传播能力, 高剂量感染能引起亚急性或慢性病程,部分猪只死亡,低剂量感染 引起非致死性的持续感染。从传播性看,非洲猪瘟病毒变异株临 床传播性与经典毒株无明显区别。从临床特点看,临床症状不典 型,与2018 年传入毒株有明显差异,常表现为采食量下降、体表发
红、皮肤坏死、淋巴结肿大、肺炎等症状;显微镜下多器官特别是淋
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巴结和肾脏可见伴有梗塞和血栓的坏死和出血区,以及慢性纤维 化病变。，从易感性看,妊娠母猪和育肥猪的易感性无明显差异,妊 娠母猪群体生产性能受影响较大.病毒感染潜伏期过后,母猪表 现反复发烧,不食等症状,部分母猪出现流产、高比例死胎、乳房结 痂等症状;初生仔猪活力差;育肥群静止状态下的症状不显著,应 激情况下可排毒,表现皮肤坏死,关节肿大,脾脏肿大、坏死等临床 症状和剖检变化。
二、防控难点
(一) 隐蔽性强
非洲猪瘟病毒变异株感染潜伏期长,病猪初期无临床表现或 临床症状不典型,致死率较低,不易被识别.感染变异株的猪群口 腔排毒滞后,排毒不规律,采样检测很难及时发现,导致猪群隐性 带毒并间歇性排毒,很难做到精准清除,并且经多次转群、并群等 操作,感染源可能遍布多栋猪舍,呈现多点同时发病的特点.实践 中,常有猪场在实时荧光定量PCR 方法检测时Ct 值较高,但因猪 只临床表现健康,未能及时采取有效措施,致使猪只在应激和混合 感染等因素诱发下发病。
(二) 检测难度大
非洲猪瘟病毒变异株感染前期病毒滴度较低,感染后产生抗 体延迟,常规鉴别诊断方法有局限性,在出现变异株的情况下,容
易造成误判.此外,过高频次的全群普查也会增加交叉污染或扩
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散风险.因此如果监测方案和检测方法选择不当,有可能造成病 毒传播和扩散。
三、防控措施
(一) 加强临床巡视
做好技术培训,提高饲养人员识别能力,一旦发现猪只出现嗜 睡、轻触不起、采食量减少、拱料不食、发热、皮肤发红、关节肿胀/ 坏死、咳喘、腹式呼吸,育肥猪死淘率增高,母猪流产或出现死胎/ 木乃伊胎等可疑临床表现时,第一时间采样检测.有条件的养殖 场可使用红外线热成像仪对所有猪群进行每日一次的体温监测, 发现体温异常猪只,及时进行采样检测.通过每日体温筛查,减少 猪场采样频次,达到降本增效目的.
(二) 优化监测方案
针对变异株的病原特点,优化监测方案.每日开展猪场场内 巡栏,监测猪群临床症状和体温变化.定期开展场外环境采样检 测。每周对猪群进行病原和抗体监测。监测采样时可对全群进行 20~30% 比率的抽样检测.在猪群进行疫苗接种、转群、去势,或 母猪分娩后,开展抽样检测.一旦猪只出现疑似临床症状,立即采 样检测。
育肥猪群:猪场发现临床异常猪只后,立即对育肥猪群进行大 栏棉绳口腔液采样,及时送检进行病原检测.
产房:在母猪分娩后,采集脐带血、胎衣或胎衣液等样品以及
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母猪口鼻拭子联合尾根血混样样品进行病原检测。
病死猪:在确保养殖场内生物安全的情况下,及时采集病死猪 淋巴结、肺脏等样品在当天送检。有研究报道非洲猪瘟病毒变异 株在猪淋巴结、肺脏病毒载量最高,采集相应组织样品进行检测, 可提高检出率。
环境:定期对猪场内料槽、风机等进行环境样品检测。国家非 洲猪瘟区域实验室(广州)研究发现,养殖场内料槽样品的病毒核 酸检出时间早于猪只出现异常临床症状的时间。
(三)科学采样检测
国家非洲猪瘟区域实验室(广州)研究发现,采取口鼻拭子联 合尾根血混样,或口鼻拭子联合腹股沟淋巴结穿刺混样的检测采 样方法,可提高病原检出率.同时还应当采集临床异常猪的前腔 静脉血或尾静脉血,分离血清后进行非洲猪瘟病毒抗体检测.
采样:使用聚丙烯材质拭子,避免使用头部为棉花制品的拭 子、含海藻酸钙拭子以及木柄拭子,防止棉花纤维对蛋白质吸附影 响病毒洗脱效果及抑制PCR反应的物质影响检测结果。
样品保存:样品保存管应使用无菌、对核酸无吸附作用的螺旋  盖塑料管。每个样品管应再套一个样品袋防止样品泄露和污染。 新鲜采集的临床标本应在2~8 ℃条件下,在采集后2~4h 内送至  实验室.用于病毒分离和核酸检测的样品应当尽快进行检测,能
在24h内检测的样品可置于4℃保存;24h 内无法检测的样品则应
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当置于-70℃或以下保存(如无-70℃保存条件,则于-20℃冰箱暂 存）。
病原检测方法:可采用非洲猪瘟病毒(P72/CD2v/MGF)  三重 实时荧光定量PCR 方法,也可采用发明专利 CN112646934B提供 的非洲猪瘟病毒(P72/EGFP/mChery) 三重实时荧光定量PCR 方 法检测病毒核酸.对非常见基因变异且临床症状特殊的病例,需 进一步送相关实验室进行全基因组测序鉴别。
抗体检测方法:采用《非洲猪瘟诊断技术》(GB/T18648) 规定 的间接 ELISA、阻断 ELISA 等方法进行抗体检测。
（四） 强化生物安全防护措施
我国非洲猪瘟防控实践表明,落实好常态化防控措施能有效 阻止非洲猪瘟病毒感染.针对非洲猪瘟病毒变异株的流行特点, 要持续从人、车、物、猪等方面强化防控措施。
1.人员管理
人员在进场前3天不得去菜市场、猪场、屠宰厂(场)、无害化 处理厂(场) 及动物产品交易市场等生物安全高风险场所.根据 不同区域生物安全等级进行人员管理,人员遵循单向流动原则,禁 止逆向进入生物安全更高级别区域。
进入办公/生活区域人员:要更换干净消毒过的衣服及鞋靴, 洗手消毒并有效淋浴后,方可进场,淋浴时必须注意指甲的清洗.
实践表明,一次有效的淋浴(沐浴露和洗发水淋浴5分钟以上) 可
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以消除人员体表携带的病毒;随身物品经消毒后入场,严禁携带猪 肉制品入场;未经允许,禁止进入生产区.进入生产区前,人员要 在生产区淋浴间洗澡,所携带物品须经生产区物资消毒间消毒后, 方可带入。
进入猪舍的流程:人员按照规定路线进入各自工作区域,禁止 进入未被授权的工作区域。每栋猪舍入口处都应该放置消毒盆 (桶)、洗手消毒盆.进出猪舍前注意洗手,清洗、消毒工作靴,程 序为先刷洗鞋底、鞋面污物,后在脚踏消毒盆(桶) 浸 泡 消 毒 .人 员离开生产区,将工作服放置含有消毒剂的桶中浸泡消毒.严禁 饲养人员互串猪舍。
2.车辆管理
猪场车辆管理:主要包括外来运猪车、饲料运送车、收集死猪/ 猪粪车、私家车等外部车辆;内部运猪车、拉料车、运死猪/猪粪车 等内部车辆。外部车辆进入场区需经彻底清洗、消毒、烘干。
外来运猪车管理:外来运猪车应为在畜牧兽医部门登记的备 案车辆,经过清洗、消毒及干燥后,方可接近猪场出猪台或中转站 ( 台) .运输后对车辆所经道路进行彻底消毒.
饲料运送车管理:饲料运送车停放在场区外安全距离,对车体 和车轮进行消毒,卸下饲料后,由场内人员对饲料外包装表面消 毒.建议设置中转料塔、场内饲料运输车,饲料可从场外直接输送
到中转料塔,运输车辆不必进入猪场内.
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内部运猪车管理:选择场内空间相对独立的地点进行车辆洗 消和停放。运猪车使用完毕后立即到指定地点清洗、消毒及干燥。 流程包括:清洗,确保表面无污物;清洁剂处理有机物;消毒剂喷洒
消毒;充分干燥.
死猪/猪粪运输车管理:死猪/猪粪运输车专场专用。交接死 猪/猪粪时,避免与外部车辆接触,交接地点距离场区大于100~  200 米.使用后,车辆及时清洗、消毒及干燥,并消毒车辆所经道 路。
3.物资管理
猪场物资管理主要包括食材、生活物资、兽药疫苗、饲料、设备 以及其他入场物资的管理。
入场食材管理:在入场食材的选取上,要求食材生产、流通背 景清晰、可控,无病原污染;禁止生鲜猪肉及制品入场;蔬菜和瓜果 类食材无泥土、无烂叶,禽类和鱼类食材无血水,经食品消毒处理 后入场.进入生产区的饭菜,应由猪场厨房提供熟食,生鲜食材禁
止进入;饭菜容器经消毒后进入.
入场兽药疫苗管理:严格执行进场消毒,疫苗及有温度要求的 药品,拆掉外层包装,使用消毒剂浸泡消毒后再转入储存或立即使 用.其他常规药品,拆掉外层包装,经烘干、或臭氧、或熏蒸消毒, 转入储存或立即使用。严格按照说明书或规程储存、使用疫苗及
药品,疫苗瓶和注射器等医疗废弃物及时无害化处理.
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饲料管理:禁止从疫区购买玉米等饲料原料,确保饲料无病原 污染.了解购进的全价饲料是否含有动物源性饲料添加剂,避免 饲料中添加动物源性饲料添加剂,特别是乳猪料.饲料经充分干 燥或加热熟化后使用,所有饲料包装袋均充分消毒(臭氧或熏 蒸).禁止饲喂餐厨剩余物.
4.猪群管理
避免场外散养或放养:避免场外散养和放养模式,防止家猪与 野猪接触,采食丢弃的垃圾食物.
实施"全进全出"管理制度:"全进全出"模式是猪场饲养管 理、减少疫病循环传播的核心。
引进猪只管理:坚持自繁自养。引种时要严格采取检测和隔 离措施.引种前需经过非洲猪瘟等重大动物疫病检测,抗原、抗体 检测结果合格,可进行场外或场内特定区域隔离检疫,确认安全方 可引种.对仅饲养育肥猪的猪场,全部空栏消毒后再购入仔猪,应 到非疫区、有良好声誉和信用的正规养猪场,经官方兽医检疫合格 后方可购进,密切关注猪只健康情况.
每日临床巡视排查:做好非洲猪瘟的日常巡视排查,便于早发 现、早检测、早处理。养殖场户要加强学习和掌握非洲猪瘟防控知 识,每天进行健康检查.一旦发现猪只表现精神不好,厌食,体温 升高,皮肤发红,皮肤坏死斑块,关节肿大,母猪流产、乳房结痂等
临床症状,发病、死亡猪只增多的情况,可采集口腔液、粪便拭子等
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送检,发现阳性要及时向当地畜牧兽医部门报告.
猪只转运管理:猪只转运一般包括断奶猪转运、淘汰猪转运、 育肥猪出栏转运以及后备猪转运.根据是否自有和可控,将运输  车辆分为两类:自有可控车辆可在猪场出猪间(台) 进行猪只转  运;非自有车辆不可接近猪场出猪间(台) ,由自有车辆将猪只转  运到中转站(台)交 接.
售猪管理:禁止生猪贩运人员、承运人员等外来人员,以及外 来拉猪车辆进入养殖场。避免场内外人员交叉。猪场赶猪人员严 禁接触出猪间(台)靠近场外生猪车辆的一侧,外来人员禁止接触 出猪间(台) 靠近场内一侧.售猪前、后,立即对出猪间(台)、停车 处、赶猪通道和装猪区域进行全面清洗消毒。注意硬化出猪间 (台) 及附近区域、赶猪通道,方便冲洗、消毒,采取防鼠、防雨水倒 流等措施。